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2022
2-18細(xì)胞凍存與細(xì)胞復(fù)蘇，是細(xì)胞培養(yǎng)過程中的常見工作。細(xì)胞凍存，是指將細(xì)胞貯存在超低溫環(huán)境中，使細(xì)胞暫時“冬眠”的技術(shù)，在需要的時候再進(jìn)行復(fù)蘇。細(xì)胞復(fù)蘇，是把凍存在-80℃冰箱或液氮中的細(xì)胞快速解凍，并使細(xì)胞重新恢復(fù)生長的技術(shù)。本文將為大家介紹細(xì)胞凍存與復(fù)蘇的技術(shù)要點和操作步驟。細(xì)胞凍存篇凍存原則細(xì)胞凍存原則為“慢凍”，即讓細(xì)胞在緩慢降溫的條件下逐漸冷凍。如果直接將細(xì)胞懸液放在超低溫下快速冷凍，細(xì)胞會受到冷凍損傷而死亡。在凍存液中添加的保護(hù)劑（如DMSO、甘油）和在凍存盒中添加的異...
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2-15各類細(xì)胞產(chǎn)品是我們做實驗研究的基礎(chǔ)，一支小小的細(xì)胞，關(guān)乎我們各種實驗的成功與否，細(xì)胞的”小事情“，在實驗中都是”大事情“，如果你的細(xì)胞出現(xiàn)生長緩慢、不貼壁等情況，那你可要注意了，這就是細(xì)胞狀態(tài)不好的信號，要及時“挽救”，不然很有可能細(xì)胞就瀕臨死亡。問題一：細(xì)胞生長緩慢細(xì)胞長得慢是細(xì)胞培養(yǎng)過程中比較常見的問題，一般來說，細(xì)胞活力和濃度一直是細(xì)胞健康的標(biāo)志，細(xì)胞長得慢的話，活力和濃度可能都會直線下降。造成細(xì)胞生長緩慢的主要原因及解決方法：1，新配置的培養(yǎng)基以及換了新的血清，細(xì)胞不...
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2-11示例：細(xì)胞用FITC-AnnexinV/PI熒光雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒檢測效果圖。Jurkat細(xì)胞用1μM喜樹堿(Camptothecin)(左)或未加藥(右)處理4h，F(xiàn)ITC-AnnexinV/PI熒光雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒染色后，流式細(xì)胞儀熒光檢測。AnnexinV-FITC單陽性細(xì)胞為早期凋亡細(xì)胞，AnnexinV-FITC和PI染色雙陽性的細(xì)胞為壞死細(xì)胞或者晚期凋亡。PI單染色陽性位裸核細(xì)胞。實測數(shù)據(jù)可能會因細(xì)胞類型、細(xì)胞凋亡情況，檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)...
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2-10養(yǎng)細(xì)胞的小伙伴們都知道，細(xì)胞一定要傳代，因為細(xì)胞在培養(yǎng)過程中不斷的繁殖，數(shù)量也隨之增加，然而培養(yǎng)皿/培養(yǎng)瓶的空間有限，增殖受到抑制，所以必須將一部分細(xì)胞移至別的培養(yǎng)皿/培養(yǎng)瓶，讓細(xì)胞有足夠生長空間。細(xì)胞傳代也不僅僅是為細(xì)胞安一個更大的“家”，更重要的，是使細(xì)胞系或細(xì)胞株進(jìn)一步增殖，這樣，我們才能有足夠的細(xì)胞做各種各樣的實驗。但是，對于傳代的時間，很多小伙伴都掌握不好，因為對于不同的細(xì)胞來說，判斷能否開始傳代的標(biāo)準(zhǔn)略有不同，今天，我們就主要來聊一下，細(xì)胞傳代的時間問題。什么時候...
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1-20胎牛血清中可能出現(xiàn)的沉淀物是什么？①纖維蛋白，它是經(jīng)常出現(xiàn)的較大的沉淀物，可以達(dá)到1-2mm，可以用肉眼觀察到。②磷酸鈣，它也是常見的一種沉淀物，通常會使血清出現(xiàn)渾濁，并且在37℃培養(yǎng)的時候會增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點，這些小黑點由于布朗運(yùn)動看上去可以活動，因此經(jīng)常被誤認(rèn)為是微生物污染。③膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì)，它們也是血清中出現(xiàn)沉淀物的常見原因。關(guān)于細(xì)胞生長，我們的試驗以及經(jīng)驗表明沉淀物不會影響細(xì)胞培養(yǎng)，我們的客戶以及其它血清生產(chǎn)商也證明了這一點。那...
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1-19一、程序凍存步驟（需梯度降溫）1、配置凍存液，凍存液推薦配比：55%（基礎(chǔ)培養(yǎng)基）+40%(血清)+5%（DMSO）或90%胎牛血清+10%DMSO；推薦使用Procell通用血清型程序凍存液，貨號PB180436；2、制備好的細(xì)胞懸液計數(shù)，計算總細(xì)胞量；3、細(xì)胞離心后盡量吸干凈上清，離心轉(zhuǎn)速1200rpm（250g）3min；4、加入配置好的凍存液重懸，調(diào)整細(xì)胞濃度為3×106~1×107cells/mL；5、分裝入凍存管，一個凍存管分裝1~1.5毫升；6、推薦使用程序降溫...
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1-7將動物機(jī)體的各種組織從機(jī)體中取出，經(jīng)各種酶(常用胰蛋白酶)、螯合劑(常用EDTA)或機(jī)械方法處理，分散成單細(xì)胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養(yǎng)。原代細(xì)胞培養(yǎng)的步驟一般是：取材→分離→培養(yǎng)和維持，今天我們重點介紹原代細(xì)胞的取材和分離方法。一、取材人和動物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。取材的基本要求：①取材要注意新鮮和保鮮②應(yīng)嚴(yán)格無菌③防止機(jī)械損傷④去除無用組織和避免干燥⑤應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等⑥作...
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5-7細(xì)胞一般儲存在液氮中,溫度達(dá)196°C,理論上儲存時間是無限的。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,實驗證明這樣可以zuida限度的保存細(xì)胞活力。細(xì)胞復(fù)蘇就是要把原本冷凍保存(凍存)著的細(xì)胞恢復(fù)到一般的生長狀態(tài),今天我們來看看原代細(xì)胞的復(fù)蘇步驟。一、檢查收到細(xì)胞株包裹時,請檢查細(xì)胞株冷凍管是否有解凍情形,若有請立即處理告訴寄方。細(xì)胞株請盡速開始培養(yǎng),或立即冷凍保存(置于-70。C,隔夜后,移到iqN2)。二、冷凍細(xì)胞解凍1、依據(jù)細(xì)胞株說明書zhiding的基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清...
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