本試劑盒專為小鼠椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞分離與培養(yǎng)設(shè)計(jì)，提供從組織消化到原代培養(yǎng)的全流程解決方案。通過優(yōu)化試劑配方與操作流程，可高效獲取高純度、高活力的纖維環(huán)細(xì)胞，適用于椎間盤退變機(jī)制研究、組織工程及再生醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的體外模型構(gòu)建。

產(chǎn)品組成

試劑盒包含以下核心組件，所有組件均標(biāo)注規(guī)格（3Tests/10Tests）、儲(chǔ)存條件及有效期：

• 小鼠椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞專用清洗液
  規(guī)格：3Tests（250 mL）；10Tests（500 mL×2）
  儲(chǔ)存條件：2-8℃
  有效期：12個(gè)月

• 小鼠椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞專用消化液
  規(guī)格：3Tests（15 mL）；10Tests（50 mL）
  儲(chǔ)存條件：-5~-20℃
  有效期：12個(gè)月

• 小鼠椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基
  規(guī)格：3Tests（50 mL）；10Tests（100 mL）
  儲(chǔ)存條件：2-8℃
  有效期：12個(gè)月

• 小鼠椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞添加劑
  規(guī)格：3Tests（10 mL）；10Tests（20 mL）
  儲(chǔ)存條件：-5~-20℃
  有效期：12個(gè)月

• 100 μm細(xì)胞濾網(wǎng)
  規(guī)格：3Tests（3個(gè)）；10Tests（10個(gè)）
  儲(chǔ)存條件：常溫
  有效期：36個(gè)月

• 70 μm細(xì)胞濾網(wǎng)
  規(guī)格：3Tests（3個(gè)）；10Tests（10個(gè)）
  儲(chǔ)存條件：常溫
  有效期：36個(gè)月

核心組件功能解析

1. 專用清洗液
   含pH緩沖體系與蛋白酶抑制劑，有效去除血液與雜質(zhì)，維持細(xì)胞表面抗原完整性。

2. 專用消化液
   復(fù)合酶配方（含膠原酶與胰蛋白酶），精準(zhǔn)降解細(xì)胞外基質(zhì)，最大限度保留細(xì)胞活性。

3. 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+添加劑
   含胎牛血清、生長(zhǎng)因子及抗氧化劑，支持纖維環(huán)細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)與增殖。

實(shí)驗(yàn)流程

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

自備器材：

• EP管架（2個(gè)）、手術(shù)器械（眼科剪×3、直鑷×1、彎鑷×2、顯微直鑷×1、顯微彎鑷×1、手術(shù)刀及刀片）

• 培養(yǎng)皿（6cm/10cm）、T25培養(yǎng)瓶、泡沫解剖板、離心管（2mL/15mL/50mL）

預(yù)處理建議：

• 正式實(shí)驗(yàn)前使用1-2只正常小鼠進(jìn)行解剖模擬訓(xùn)練，優(yōu)化操作速度與組織分離精度。

操作步驟

1. 組織獲取與清洗 

• 解剖取小鼠椎間盤組織，置于預(yù)冷的清洗液中漂洗3次（每次5分鐘），去除附著的肌肉與脂肪。

2. 消化處理 

• 將組織剪碎至1mm3大小，加入消化液（37℃孵育40-60分鐘），每10分鐘輕柔吹打一次。

3. 過濾與離心 

• 消化液經(jīng)100μm濾網(wǎng)過濾去除大塊殘?jiān)?，收集濾液；再經(jīng)70μm濾網(wǎng)過濾，得到單細(xì)胞懸液。

• 1000rpm離心5分鐘，棄上清，用基礎(chǔ)培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。

4. 培養(yǎng)與傳代 

• 接種至T25培養(yǎng)瓶，添加含添加劑的培養(yǎng)基，置于37℃、5% CO?培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每2-3天換液，待細(xì)胞融合度達(dá)80%時(shí)傳代。

注意事項(xiàng)

1. 無菌操作 

• 試劑分裝后立即用封口膜密封，避免反復(fù)凍融；所有操作需在超凈工作臺(tái)完成。

2. 消化控制 

• 過度消化會(huì)損傷細(xì)胞膜，需通過顯微鏡觀察組織消化狀態(tài)（以大部分細(xì)胞分散為單個(gè)或小團(tuán)塊為宜）。

3. 細(xì)胞活性驗(yàn)證 

• 建議使用臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞活力（>90%為合格）。

常見問題解答

Q1：消化后細(xì)胞聚集成團(tuán)如何處理？
A：可適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間，或增加吹打次數(shù)，但需避免產(chǎn)生過多泡沫。

Q2：培養(yǎng)基出現(xiàn)沉淀是否正常？
A：基礎(chǔ)培養(yǎng)基含血清成分，低溫儲(chǔ)存可能產(chǎn)生少量沉淀，37℃水浴復(fù)溶后不影響使用。

儲(chǔ)存與運(yùn)輸

• 低溫組件（消化液、添加劑）：干冰運(yùn)輸，收到后立即存于-20℃。

• 常溫組件（濾網(wǎng)）：避光干燥保存。

• 開封后建議：清洗液與培養(yǎng)基4℃保存并于1個(gè)月內(nèi)用完；消化液與添加劑分裝后-20℃保存，避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
? 專用配方：針對(duì)纖維環(huán)細(xì)胞特性優(yōu)化，提升分離效率與細(xì)胞純度
? 操作便捷：預(yù)配試劑減少實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備時(shí)間，標(biāo)準(zhǔn)流程降低操作誤差
? 穩(wěn)定可靠：嚴(yán)格質(zhì)控確保批次間一致性，支持大規(guī)模實(shí)驗(yàn)需求