臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞建議包被，建議選用0.1%明膠包被，包被的細(xì)胞形態(tài)會比不包被的好看。

角質(zhì)細(xì)胞生長類似上皮細(xì)胞，營養(yǎng)環(huán)境要求高，建議使用膠原蛋白包被。

傳代后邊界不清晰，考慮細(xì)胞是否需要外基質(zhì)條件，嘗試包被培養(yǎng)瓶；其次考慮細(xì)胞是否老化、分化。

真菌污染細(xì)胞，建議丟棄，避免對其他細(xì)胞造成交叉污染，損失更大；若要挽救，建議隔離培養(yǎng)，加兩性-霉素B等抗生素，每天換液，持續(xù)清除，但只能維持幾周，后續(xù)培養(yǎng)會反復(fù)爆發(fā)，耗費(fèi)成本更高。

污染較輕的，不會影響細(xì)胞狀態(tài)，出現(xiàn)大量碎片，細(xì)胞內(nèi)部也有碎片，污染就很嚴(yán)重了，支原體清除試劑對外部清除有效，內(nèi)部較難清除；同時在細(xì)胞內(nèi)部已損傷情況下，沒有必要清除，此時細(xì)胞已經(jīng)喪失很多功能，建議廢棄。

肝細(xì)胞營養(yǎng)環(huán)境要求較高，建議包被，不包被影響貼壁率（低于50%），長時間培養(yǎng)不包被會導(dǎo)致細(xì)胞卷曲聚團(tuán)，影響狀態(tài)。

原代細(xì)胞復(fù)蘇貼壁少，生長慢，首先是調(diào)整細(xì)胞密度保持在70%以上，確保生長狀態(tài)，其次選用高質(zhì)量血清或培養(yǎng)基進(jìn)行補(bǔ)救，也可以補(bǔ)加5%血清。

一般建議：

分離初期紅細(xì)胞較多，可用淋巴細(xì)胞分離液或Percoll分離液分離，也可用裂解液處理。

貼壁法細(xì)胞爬出慢，周期長，成功率不高耗費(fèi)時間，得到的細(xì)胞活性相對高；消化法，速度快，數(shù)量多，剛分離的活性差一點(diǎn)，后期培養(yǎng)要適應(yīng)，看自主需求選擇。

理論上無傳代次數(shù)限制，實(shí)際培養(yǎng)中，受離體培養(yǎng)環(huán)境變化、血清質(zhì)量、培養(yǎng)基質(zhì)量、傳代損傷等外部培養(yǎng)環(huán)境影響，細(xì)胞超過10代以上會出現(xiàn)分化、不增殖、老化凋亡等問題，所以常規(guī)建議10代以內(nèi)使用。

骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞，本身貼壁性不強(qiáng)，易漂浮，特別是局部密度大會導(dǎo)致細(xì)胞聚集成束，最后分化形成肌管束，建議培養(yǎng)中均勻接種，包被增強(qiáng)吸附性，控制密度在70-80%。

脂肪細(xì)胞原代培養(yǎng)沒分出細(xì)胞，一是要檢查分離方法是否正確，中間每一步操作最好進(jìn)行鏡檢，可以找出是哪一步損失細(xì)胞的，二是考慮后面離心步驟是否損失細(xì)胞，細(xì)胞包含脂滴，密度較小，漂浮丟棄了也有可能。